魚(yú)ELISA試劑盒樣品采集及血清分離中要注意避免細菌污染

魚(yú)ELISA試劑盒樣品收集和保存：
用于ELISA測定常用的臨床標本是血清（漿）。要注意避免嚴重溶血，因為血紅蛋白中含有具有類(lèi)似過(guò)氧化物活性的血紅素基團，在孵育時(shí)很容易吸附于固相，與HRP底物反應產(chǎn)生假陽(yáng)性。
魚(yú)ELISA試劑盒樣品采集及血清分離中要注意避免細菌污染，一方面細菌分泌的酶可能對抗原抗體等蛋白產(chǎn)生分解作用，另一方面，細菌的內源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶會(huì )對相應酶作標記的測定方法產(chǎn)生非特異性干擾。
魚(yú)ELISA試劑盒樣品應該要避免反復凍融。因反復凍融所產(chǎn)生的機械剪切力對標本中的蛋白等分子產(chǎn)生破壞作用，從而引起假陰性結果。另外，樣品混勻時(shí)，不要劇烈振蕩，反復顛倒混勻即可。
一般而言，如果在收集樣品的當天進(jìn)行檢測，可將樣品及時(shí)儲存在4℃備用；而對隔天再檢測的樣本，應及時(shí)分裝后凍存在-20℃備用，若要長(cháng)期保存樣品，好將其置于-70℃凍存。
實(shí)驗具體步驟：
1、魚(yú)ELISA試劑盒試劑準備
在實(shí)驗開(kāi)始前，需將試劑盒從冰箱中拿出來(lái)在室溫放置20min，再進(jìn)行測定，以使試劑盒在使用前與室溫平衡，也可使溫育時(shí)反應孔內的溫度能較快的達到所要求的高度，以滿(mǎn)足測定要求。
其次，目前商品中ELISA試劑盒中的洗板液均需在實(shí)驗過(guò)程中對其所提供的濃縮液進(jìn)行稀釋配制，因此稀釋時(shí)所用的蒸餾水或去離子水應該保證質(zhì)量。此外，底物反應液應該反應顯色前進(jìn)行現配現用。同時(shí)，為了保證實(shí)驗的均一性，實(shí)驗中所有試劑在加樣前必須搖勻。
2、魚(yú)ELISA試劑盒加樣
因ELISA的靈敏度較高，則應該按規定將血清稀釋至適當的倍數，以降低非特異性反應，使特異性的抗原抗體反應充分體現出來(lái)。
加樣品時(shí)，單孔用量要求：≥20ul/指標，如需要做2個(gè)復孔則血量≥60ul/指標。如果用量充足，好提供50ul/孔/指標。具體用量也需根據試劑盒的要求而定。
吸取樣品時(shí)，加樣槍頭不應粘附多余的液體；加樣時(shí)不可90度向孔中滴加液體，否則會(huì )導致液體殘留在吸頭上，加樣不準確。正確加樣方法應為45度，吸頭貼著(zhù)孔壁和液面的交界處加入。
加樣時(shí)速度不可過(guò)快，否則無(wú)法保證微量加樣的準確性和均一性；要避免樣品加在孔壁上部而產(chǎn)生非特異性吸附。不可將樣品濺出以避免對鄰近孔產(chǎn)生污染。