科研ELISA試劑盒是干什么用的，又該怎么用呢？

更新時(shí)間：2020-07-21

瀏覽次數：1707

　　科研ELISA試劑盒即酶聯(lián)吸附試驗，是一種常用的固相酶免疫測定方法。Engvall 和Perlmann于1971年應用該法進(jìn)行了IgG定量測定，并命名為"enzyme linked immunosorbent assay (ELISA)"。

　　科研ELISA試劑盒免疫測定的目的：

　　1.測定體液中的各種蛋白質(zhì)，包括含量極少的蛋白質(zhì)如甲胎蛋白等；

　　2.測定激素，包括小分子量的甾體激素等；

　　3.測定抗生素和藥物；

　　4.測定病原體抗原，HBsAg、HBeAg等；

　　5.利用純化的抗原檢測標本中的抗體，例如抗-HBs等；

　　ELISA的基本原理

　?、偈箍乖ɑ蚩贵w）結合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性；

　?、谑箍乖ɑ蚩贵w）與某種酶聯(lián)結成酶標抗原（或抗體），而且此酶標抗原（或抗體）既保留其免疫活性，又保留其酶活性；

　?、蹨y定時(shí)將受檢標本（抗體或抗原）和酶標抗原（或抗體）按不同步驟與固相載體表面的抗原或抗體進(jìn)行反應，再用洗滌方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與其它物質(zhì)分開(kāi)，后結合在固相載體上的酶量與標本中受檢的抗體或抗原量成一定比例；再加入酶反應底物后，底物被酶催化后變?yōu)橛猩a(chǎn)物，根據其顏色反應的深淺進(jìn)行定性或定量分析，以了解被測標本中抗體或抗原含量。

　　科研ELISA試劑盒實(shí)驗方法被廣泛應用于各種抗原和抗體測定。但ELISA測定中影響因素較多，而且其操作中有一定的技術(shù)要求，在中除正常反應外，有時(shí)?？梢?jiàn)到一些錯誤結果（即假陽(yáng)性或假陰性結果）。引起ELISA測定錯誤結果的原因主要有：①標本因素；②試劑因素；③操作因素。本文就標本因素對ELISA測定的影響做如下討論。

　　科研ELISA試劑盒實(shí)驗步驟

　　1.包被；

　　2.加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中，置37℃孵育1小時(shí)。然后洗滌(同時(shí)做空白孔，陰性對照孔及陽(yáng)性對照孔)；

　　3.加酶標抗體：于各反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃孵育0.5～1小時(shí)，洗滌。

　　4.加底物液顯色：于各反應孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分鐘；

　　5.終止反應：于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml；

　　6.結果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀(guān)察結果：反應孔內顏色越深，陽(yáng)性程度越強，陰性反應為無(wú)色或極淺。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm處，以空白對照孔調零后測各孔OD值。

　　血清是ELISA標本，血漿一般可視為與血清同等的標本，標本引起的假陽(yáng)性和假陰性結果主要是干擾性物質(zhì)所致，分為內源性物質(zhì)和外源性物質(zhì)兩種。

上一篇：ELISA試劑盒該怎么選擇，掌握這五個(gè)步驟
下一篇：盤(pán)點(diǎn)Gibco胎牛血清使用中常見(jiàn)的四大問(wèn)題

科研ELISA試劑盒是干什么用的，又該怎么用呢？

科研ELISA試劑盒是干什么用的，又該怎么用呢？