PRODUCT CLASSIFICATION
產(chǎn)品分類(lèi)細小病毒抗體檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫法)
使用說(shuō)明書(shū)
【產(chǎn)品名稱(chēng)】
通用名:豬細小病毒抗體檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫法)
英文名:Test Kit for Antibodies to Porcine Parvovirus (ELISA)
【包裝規格】 96T×1/盒、96T×2/盒、96T×5/盒
【預期用途】 豬細小病毒病是由豬細小病毒(Porcine Parvovirus,PPV)引起的豬的繁殖障礙性疾病,其特征為受感染的母豬,特別是初產(chǎn)母豬產(chǎn)出死胎、畸形胎、木乃伊胎及病弱仔豬,而母豬本身無(wú)明顯癥狀。
本試劑用于檢測豬血清中豬細小病毒抗體,可用于豬細小病毒疫苗免疫效果評價(jià)。
【原 理】
本試劑盒由預包被豬細小病毒抗原的酶標板、酶標記物及其他配套試劑組成,應用酶聯(lián)免疫法(ELISA)原理檢測豬血清、血漿樣本中豬細小病毒抗體。實(shí)驗時(shí)在酶標板中加入對照血清和待檢樣本,經(jīng)溫育后若樣品中含有豬細小病毒抗體,則將與酶標板上抗原結合,經(jīng)洗滌除去未結合的其他成分后;再加入酶標記物,與酶標板上抗原抗體復合物發(fā)生特異性結合;再經(jīng)洗滌除去未結合的酶標記物,在孔中加TMB底物液,與酶標結合物反應形成藍色產(chǎn)物,顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關(guān);加入終止液終止反應后,產(chǎn)物變?yōu)辄S色;用酶標儀在450nm波長(cháng)測定各反應孔中的吸光值,即可知樣品是否含有豬細小病毒抗體。
【試劑盒組成】
序號 | 名稱(chēng) | 規格/96T×1 | 規格/96T×2 | 規格/96T×5 |
1 | 酶標記物 | 11ml×1(紅蓋) | 11ml×2(紅蓋) | 26ml×2(紅蓋) |
2 | 樣品稀釋液 | 50ml×1(黃蓋) | 50ml×1(黃蓋) | 200ml×1(黃蓋) |
3 | 20X濃縮洗滌液 | 40ml×1(白蓋) | 40ml×1(白蓋) | 200ml×1(白蓋) |
4 | 底物液A | 6ml×1(白蓋) | 11ml×1(白蓋) | 26ml×1(白蓋) |
5 | 底物液B | 6ml×1(黑蓋) | 11ml×1(棕蓋) | 26ml×1(黑蓋) |
6 | 終止液 | 6ml×1(黃蓋) | 11ml×1(黃蓋) | 26ml×1(黃蓋) |
7 | 陽(yáng)性對照 | 1.0 ml×1(紅蓋) | 1.5 ml×1(紅蓋) | 2.0 ml×1(紅蓋) |
8 | 陰性對照 | 1.0 ml×1(綠蓋) | 1.5 ml×1(綠蓋) | 2.0 ml×1(綠蓋) |
9 | 酶標板 | 96T×1 | 96T×2 | 96T×5 |
10 | 蓋板膜 | 1 | 2 | 5 |
11 | 自封袋 | 1 | 1 | 2 |
12 | 說(shuō)明書(shū) | 1 | 1 | 1 |
13 | 稀釋板 | 1 | 2 | 5 |
【儲存及有效期】 2~8℃保存,有效期12個(gè)月。
包被板開(kāi)封后請于2~8℃避光保存,避免受潮。使用期限為2個(gè)月。
【適用儀器】 含450nm、630nm波長(cháng)的酶標儀,37℃恒溫設備,可調微量移液器。
【樣品準備】
1.取動(dòng)物全血按常規方法制備血清,要求血清清亮,無(wú)溶血、無(wú)污染。樣品1周內可于2~8℃保存,長(cháng)期需置-20℃保存。
2.用樣品稀釋液將待檢血清按40倍稀釋?zhuān)ㄈ?μl血清加入195μl樣品稀釋液中,混勻)。陰、陽(yáng)性對照不用稀釋。
3.濃縮洗滌液使用前應恢復至室溫使沉淀溶解,然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋成工作洗滌液(如19份蒸餾水或去離子水+1份濃縮洗滌液)。
【檢驗方法】
1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘,恢復至室溫。
2.取所需用量酶標板條,設空白對照1孔、陰性/陽(yáng)性對照各2孔,未用的板條盡快密封,2~8℃保存。
3.空白對照孔加樣品稀釋液100μl;陰、陽(yáng)性對照孔分別加入陰、陽(yáng)性對照100μl;樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl。
4.混勻,蓋好蓋板膜,置37℃(推薦水?。┍芄夥磻?0分鐘。
5.甩去孔內液體,每孔加350 ul工作洗滌液,靜置30秒后棄去,重復洗滌5次,最后一次拍干。
6.每孔加酶標記物100μl(空白孔除外)。蓋好蓋板膜,置37℃避光反應30分鐘。
7.洗滌,同步驟5。
8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl,混勻,蓋好蓋板膜,置37℃避光反應10分鐘。
9.每孔加終止液50μl,混勻,于450nm(可用630nm作參比波長(cháng))測定各孔吸光值,無(wú)參比波長(cháng)用空白孔調零(即所有孔吸光值減去空白孔吸光值)。
【參考值】 實(shí)驗正常的情況下,陰性對照的平均OD值即ODNC應≤0.3,陽(yáng)性對照的平均OD值即ODPC應≥0.6。
【檢驗結果的判定】
1.樣品的OD值即ODS;
2.閾值計算:SP值=(ODS-ODNC)/(ODPC-ODNC);
SP值≥0.2,結果判定為陽(yáng)性;SP值<0.2,結果判定為陰性。
3.本實(shí)驗結果為陰性時(shí)表明豬只抗體水平不足,建議補打相應疫苗。
【試驗方法的局限性】
該試驗僅作為定性檢測豬血清、血漿中豬細小病毒抗體,根據SP值高低可作抗體水平強、中、弱的粗略評估。
【注意事項】
1.實(shí)驗操作時(shí)需戴手套、穿工作衣,嚴格健全和執行消毒隔離制度,各種實(shí)驗廢棄物都應按傳染物處理。
2.終止液具有腐蝕性,應避免接觸皮膚和衣物,如不慎接觸請立即用大量自來(lái)水沖洗。
3.酶標板從冷藏環(huán)境中取出時(shí)應恢復至室溫方可開(kāi)袋,未用完的酶標板需放入有干燥劑的密封袋中保存。
4.濃縮洗滌液在低溫時(shí)容易結晶,使用時(shí)需恢復至室溫以*溶解。
5.洗滌時(shí)各孔均需加滿(mǎn)液體,防止孔口有游離酶不能洗凈。
6.用于檢測的樣品應保持新鮮。
7.試驗結果的判定必須以酶標儀讀數為準。
8.不同批號試劑組分不得混用。
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