談?wù)凟LISA實(shí)驗中關(guān)于跳孔的疑問(wèn)及解決方法

更新時(shí)間：2021-08-10

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　　今天小編給大家講講ELISA實(shí)驗中關(guān)于跳孔的疑問(wèn)及解決方法：

　　問(wèn)：我剛配置試劑的時(shí)候中斷了，這是否會(huì )影響我的實(shí)驗結果?

　　答：這可能會(huì )導致產(chǎn)生波動(dòng)的曲線(xiàn)。在移液之前確定所有的標準品或者樣品是否配制完好。請在試劑配制完的15-20分鐘內滴加入板內。(除非特別說(shuō)明)

　　問(wèn)：我是否需要一個(gè)多道移液器?

　　答：在配制諸如底物，酶結合物，或者稀釋液的時(shí)候，最好選擇連續或多道移液器。

　　問(wèn)：如果我沒(méi)有平衡試劑會(huì )怎樣?

　　答：沒(méi)有平衡的試劑會(huì )導致孔之間溫度不均，使整個(gè)酶標板的信號產(chǎn)生變異。除非特別說(shuō)明，試劑一般在使用之前都要平衡至室溫。

　　每次檢測都會(huì )有推薦的孵育時(shí)間和溫度。冷凍的試劑一般需要更長(cháng)的孵育、間。所以最好使用說(shuō)明書(shū)上推薦的孵育溫度和時(shí)間。

　　問(wèn)：我是否需要蓋板?

　　答：參看試劑盒內說(shuō)明書(shū)。如果說(shuō)明書(shū)內的實(shí)驗步驟中有推薦使用蓋板，則在使用時(shí)應選用與酶標板配套的蓋板，使邊緣與酶標板緊密契合。如果蓋板的一邊突起，則會(huì )產(chǎn)生信號的差別。

　　問(wèn)：酶標儀的設置怎樣影響我的結果?

　　答：對于底物測定，如果讀數時(shí)間等于或超過(guò)2秒/孔，使從第一孔到最后一孔在讀書(shū)時(shí)存在時(shí)間上的延誤，會(huì )導致結果的異變。在底物反應階段，辣根過(guò)氧化物酶會(huì )一直作用直到底物反應*。而由于時(shí)間的延誤，底物越來(lái)越少，底物反應也受到影響。將酶標儀的讀數時(shí)間設定為1.0秒/孔。

　　問(wèn)：我是否可以根據自己的方案來(lái)調整孵育時(shí)間?

　　答：更改孵育時(shí)間或溫度會(huì )導致檢測不能達到平衡或過(guò)度反應。請按照說(shuō)明書(shū)推薦的孵育時(shí)間和溫度操作。如果同時(shí)進(jìn)行多項檢測，對每孔必需分別計時(shí)已避免孵育不足或過(guò)度孵育。

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