大鼠肝脂肪酸結合蛋白ELISA試劑盒科研技術(shù)實(shí)驗

1、血清：操作過(guò)程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血紅細胞迅速小心地分離。
2、血漿：EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3、細胞上清液：1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4、組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液。
5、保存：如果樣品不立即使用，應將其分成小部分-70℃保存，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過(guò)濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

 實(shí)驗原理
用純化的抗體包被微孔板，制成固相載體，往包被抗C3抗體的微孔中依次加入標本或標準品、生物素化的抗C3抗體、HRP標記的親和素，經(jīng)過(guò)*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的C3呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長(cháng)下測定吸光度(OD值)，計算樣品濃度。

標本的采集及保存
1. 血清：全血標本請于室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)夜后于1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
2. 血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標本采集后30分鐘內于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
3. 細胞培養物上清或其它生物標本：請1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
4. 樣本處理：血清或血漿標本推薦稀釋10,000倍。
注：以上標本置4℃保存應小于1周，-20℃或-80℃均應密封保存，-20℃不應超過(guò)1個(gè)月，-80℃不應超過(guò)2個(gè)月；標本溶血會(huì )影響檢測結果，因此溶血標本不宜進(jìn)行此項檢測。

操作技巧：
A、加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
B、合理安排檢測量，以免反應板過(guò)多造成洗板等待時(shí)間長(cháng)。
C、吸取液體時(shí)，要用量程和需要量接近的槍去吸，減少誤差。
D、要盡量做雙孔實(shí)驗，這樣才既能保證數據的準確性，又能反映出試劑盒的精密度。
E、樣品稀釋液應用加液器加注，并經(jīng)常校對其準確性。