科研ELISA試劑盒不適用于測定半抗原及小分子單價(jià)抗原

科研ELISA試劑盒的關(guān)鍵技術(shù)參數包括板內差異性、板間差異性、批間差異性、重復性、特異性及交叉反應性、回收率等。如果實(shí)驗君經(jīng)常開(kāi)展ELISA實(shí)驗，建議使用同一廠(chǎng)家的試劑盒，這樣可盡量保證數據的重復性（當然前提是實(shí)驗條件的一致性）。對于科研用的定量ELISA試劑盒，不同的生產(chǎn)廠(chǎng)家使用的抗體對、酶以及底物、生產(chǎn)工藝和研發(fā)實(shí)力不盡相同，自然不同廠(chǎng)家試劑盒測出的數據會(huì )有差異。
一般的科研ELISA試劑盒都經(jīng)過(guò)血清、血漿和細胞培養上清液的驗證。在選擇試劑盒時(shí)，好要詳細閱讀說(shuō)明書(shū)，比如血漿樣本抗凝劑的使用是否與試劑盒兼容。另外，在某些情形下樣品中會(huì )存在干擾因素比如溶血血漿、高脂肪含量的樣品、人抗鼠抗體（HAMA）、細胞培養上清中含胎牛血清等。因此需根據樣品來(lái)選擇試劑盒，必要時(shí)還要根據樣本來(lái)適當優(yōu)化?；蛟跇悠肥占?，好先閱讀一些可靠供應商試劑盒的說(shuō)明書(shū)或直接咨詢(xún)。如果您的樣品為組織或細胞裂解物，則需要更謹慎的選擇試劑盒。市面上大多數的商業(yè)化試劑盒沒(méi)有經(jīng)過(guò)多種來(lái)源組織樣本的驗證。這需要實(shí)驗君能理解不是所有試劑盒所用的抗體對，都能特異的從一堆裂解物蛋白中特異檢出您的目的蛋白，還要考慮組織樣品的基質(zhì)效應等。但如果實(shí)驗君要了解組織樣品的制備問(wèn)題，我們另起一文來(lái)總結。
科研ELISA試劑盒技術(shù)可用于測定抗原，也可用于測定抗體。ELISA方法中有三個(gè)必要的試劑：
（1）固相的抗原或抗體，即"免疫吸附劑"；
（2）酶標記的抗原或抗體，稱(chēng)為"結合物"；
（3）酶反應的底物。
一般可將科研ELISA試劑盒分為以下幾種類(lèi)型，實(shí)驗君首先需要根據自己的待檢物來(lái)確定試劑盒類(lèi)型。
1）科研ELISA試劑盒雙抗體夾心法：針對抗原分子上兩個(gè)不同抗原決定簇的單克隆抗體分別作為固相捕獲抗體和酶標檢測抗體。適用于測定二價(jià)或二價(jià)以上的大分子抗原如血漿中的細胞因子，科研ELISA試劑盒不適用于測定半抗原及小分子單價(jià)抗原。同理，也有雙抗原夾心法測抗體。
2）科研ELISA試劑盒直接法：將抗原直接固定在固相載體上，加入酶標記的一抗，即可測定抗原總量。此法操作手續簡(jiǎn)短，因無(wú)須使用二抗可避免交互反應。
3）間接法：間接法是檢測抗體常用的方法，其原理為利用酶標記的抗抗體（抗人免疫球蛋白抗體）來(lái)檢測與固相抗原結合的待檢抗體。
4）科研ELISA試劑盒競爭法：小分子抗原或半抗原因缺乏可作夾心法的兩個(gè)以上的位點(diǎn)，因此不能用雙抗體夾心法進(jìn)行測定，可以采用競爭法模式。當抗原材料中的干擾物質(zhì)不易除去，或不易得到足夠的純化抗原時(shí)，可用此法檢測特異性抗體。