大鼠胰島素（INS）酶聯(lián)免疫分析（ELISA）定量試劑盒

大鼠胰島素（INS）酶聯(lián)免疫分析(ELISA)定量試劑盒

本試劑僅供研究使用       目的：本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿、組織勻漿、細胞培養物上清及相關(guān)液體樣本中胰島素（INS）的含量。

實(shí)驗原理：

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠胰島素（INS）水平。用純化的大鼠胰島素（INS）捕獲抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被的微孔中依次加入大鼠胰島素（INS），再與HRP標記的檢測抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大鼠胰島素（INS）呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長(cháng)下測定吸光度（OD值），通過(guò)標準曲線(xiàn)計算樣品中大鼠胰島素（INS）含量。

試劑盒組成：

注：標準品濃度依次為：48、24、12、6、3、0 mU/L.

操作步驟

1. 標準品的加樣：設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；。
2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。
3. 加酶：每孔加入酶標試劑100μl，空白孔除外。
4. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘。
5. 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用。
6. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
7. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
8. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時(shí)藍色立轉黃色）。
9. 測定：以空白孔調零，450nm波長(cháng)依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以?xún)冗M(jìn)行。

注意事項：

1. 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開(kāi)封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。
2. 濃洗滌液可能會(huì )有結晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結果。
3. 各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。
4. 請每次測定的同時(shí)做標準曲線(xiàn)，做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過(guò)高（樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）后再測定，計算時(shí)請zui后乘以總稀釋倍數（×n×5）。
5. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6. 底物請避光保存。
7. 嚴格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
8. 所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9. 本試劑不同批號組分不得混用。

10. 如與英文說(shuō)明書(shū)有異，以英文說(shuō)明書(shū)為準。

計算：

以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，   

在坐標紙上繪出標準曲線(xiàn)，根據樣品的OD     

值由標準曲線(xiàn)查出相應的濃度；再乘以稀釋      

倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標     

準曲線(xiàn)的直線(xiàn)回歸方程式，將樣品的OD值     

代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋      

倍數，即為樣品的實(shí)際濃度。                 

（此圖僅供參考）

試劑盒性能：

1.樣品線(xiàn)性回歸與預期濃度相關(guān)系數R值為0.95以上。

2.批內變異系數與批間變異系數應分別小于10%和15% 。

檢測范圍：                                              

1.5 mU/L - 48 mU/L

靈敏度：                                              

zui低檢測濃度小于0.1 mU/L

保存條件及有效期：

1.試劑盒保存： 2-8℃。

2．有效期： 6個(gè)月